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->對(duì)PCR擴(kuò)增加產(chǎn)量物剖析 |
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對(duì)PCR擴(kuò)增加產(chǎn)量物剖析 |
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1、凝膠電泳剖析
PCR產(chǎn)物電泳,EB溴乙錠染色紫外儀下仔細(xì)查看,開始階段的判斷產(chǎn)物的特別優(yōu)異性。PCR產(chǎn)物斷片的體積應(yīng)與預(yù)計(jì)的完全一樣,尤其是多重PCR,應(yīng)用多對(duì)引物,其產(chǎn)物片段都應(yīng)合乎預(yù)訐的體積,這是最低限度條件。石花膠糖凝膠電泳一般應(yīng)用1~2百分之百的石花膠糖凝膠,供檢驗(yàn)測定用;聚丙烯酰胺凝膠電泳時(shí),6~10百分之百聚丙烯酰胺凝膠電泳離合效果比石花膠糖好,條帶比較集中,可用于科學(xué)研究及檢驗(yàn)測定剖析。
酶切剖析:依據(jù)PCR產(chǎn)物中限止性內(nèi)切酶的位點(diǎn),用相應(yīng)的酶切、電泳離合后,取得合乎理論的斷片,此法既能施行產(chǎn)物的鑒定,又能對(duì)靶基因分型,還能施行異樣變化性研討。
2、分子雜交
3、Southern印跡雜交:在兩引物之間另合成一條寡核苷酸鏈(內(nèi)里寡核苷酸)標(biāo)記后做探針,與PCR產(chǎn)物雜交。此法既可作特別優(yōu)異性鑒定,又可以增長檢驗(yàn)測定PCR產(chǎn)物的銳敏度,還可知其分子量及條帶式樣,主要用于科學(xué)研究。
4、斑點(diǎn)雜交: 將PCR產(chǎn)物點(diǎn)在硝鏹水纖維素膜或尼膜薄膜上,再用內(nèi)里寡核苷酸探針雜交,仔細(xì)查看有無著色斑點(diǎn),主要用于PCR產(chǎn)物特別優(yōu)異性鑒定及異樣變化剖析。
5、核酸序列剖析:是檢驗(yàn)測定PCR產(chǎn)物特別優(yōu)異性的最靠得住辦法。
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